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【解決方案】如何準(zhǔn)確檢測(cè)食品中PG、TBHQ、BHA和BHT?
發(fā)布日期:2024/8/1
GB 5009.32-2016

食品中4種抗氧化劑的測(cè)定

QuE-HPLC法


 

抗氧化劑是指能阻止或延緩食品氧化變質(zhì)、提高食品穩(wěn)定性和延長(zhǎng)貯存期的食品添加劑,作用機(jī)理主要為清除自由基,通過(guò)阻斷或抑制油脂氧化過(guò)程中某一階段,從而達(dá)到抑制油脂氧化的效果。

 

長(zhǎng)期過(guò)量使用抗氧化劑會(huì)對(duì)人體健康造成危害,PG可導(dǎo)致腎臟受損或接觸性皮炎等,TBHQ可能有致癌作用,世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)公布的致癌物清單中,BHA和BHT分別被列為2類致癌物和3類致癌物。因此加強(qiáng)食用油及含油制品中PG、TBHQ、BHA和BHT的監(jiān)管檢測(cè)非常必要。

 

迪馬科技依據(jù)《GB 2760-2024 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定油脂中PG、TBHQ、BHA、BHT的最大使用量,食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《GB 5009.32-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中9種抗氧化劑的測(cè)定 第一法 高效液相色譜法》中定量限要求,參考國(guó)標(biāo)建立了《食品中4種抗氧化劑的測(cè)定》,樣品經(jīng)乙腈飽和的正己烷溶解,使用正己烷飽和的乙腈提取,ProElut® QuEChERS AOD專用凈化管凈化,Diamonsil® Plus C18色譜柱分離檢測(cè);回收率在80%~110%之間。

 

本方案與國(guó)標(biāo)相比,增加了提取使用的溶劑體積,這樣可以更好地使抗氧化劑從油脂中提取出來(lái),凈化方式使用QuEChERS方法,在保證回收率和除油效果的同時(shí),大大降低了凈化所需時(shí)間。

 

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1、適用范圍

本方案適用于花生油、大豆油、玉米油、葵花籽油、橄欖油、調(diào)和油、芝麻油、棕櫚油、豬油、餅干、油炸果仁、麻花、方便面、薯片、火腿、燕麥片和花生罐頭中PG、TBHQ、BHA和BHT的測(cè)定,定量限為20mg/kg。

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2、標(biāo)準(zhǔn)品配制

(1)單標(biāo)儲(chǔ)備液10000μg/mL,稱取適量單標(biāo),用乙腈配制成10000μg/mL的單標(biāo)儲(chǔ)備液。

 

(2) 混標(biāo)中間液2000μg/mL,分別吸取2mL單標(biāo)儲(chǔ)備液10000μg/mL于10mL容量瓶中,用乙腈定容至刻度,配制成2000μg/mL的混標(biāo)中間液。

 

(3) 混標(biāo)中間液200μg/mL,分別吸取0.2mL單標(biāo)儲(chǔ)備液10000μg/mL于10mL容量瓶中,用乙腈定容至刻度,配制成200μg/mL的混標(biāo)中間液。

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3、提取

(1)取1.0g樣品,加入2.5mL正己烷(乙腈飽和),渦旋混合1min,使樣品完全溶解,靜置10min。加入20mL乙腈(正己烷飽和),渦旋振蕩提取10min,靜置5min,6000rpm離心5min,取出下層乙腈層;

 

 

(2) 向殘?jiān)性偌尤?0mL乙腈(正己烷飽和),按步驟(1)重復(fù)提取兩次,合并三次提取液,混勻,取30mL,待凈化。

注:火腿、花生罐頭樣品需加入2g無(wú)水硫酸鈉使之分散,攪拌均勻后,再加入2.5mL正己烷(乙腈飽和過(guò))。

 

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4、凈化

ProElut® QuEChERS AOD凈化管 (Cat.#: 64740)

將待凈化液加入到50mL ProElut® QuEChERS AOD凈化管中,渦旋混合1min,8000rpm離心5min,取15mL上清液于帶刻度的玻璃離心管中,在40℃水浴下通入氮?dú)獯抵列∮?mL,用乙腈定容至1mL,渦旋混勻,在-4℃下冷凍30min,取上層清液過(guò)0.45μm PTFE濾膜,上機(jī)分析。

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5、分析條件

色譜柱:Diamonsil® Plus C18, 250x4.6mm, 5μm (Cat.#: 99403)

流速:1.0mL/min

進(jìn)樣量:5μL

柱溫:35℃

檢測(cè)器:PDA 280nm

流動(dòng)相:A:甲醇   B:0.5%甲酸水溶液

梯度設(shè)置:

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6、添加回收結(jié)果及譜圖

花生油、大豆油、玉米油、葵花籽油、橄欖油、調(diào)和油、芝麻油、棕櫚油、豬油、餅干、油炸果仁、麻花、方便面、薯片、火腿、燕麥片和花生罐頭中PG、TBHQ、BHA和BHT的HPLC檢測(cè)添加回收結(jié)果。

添加濃度400mg/kg(加標(biāo)量: 2000μg/mL,0.2mL)

添加濃度200mg/kg(加標(biāo)量: 2000μg/mL,0.1mL)

添加濃度20mg/kg(加標(biāo)量: 200μg/mL,0.1mL)

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更多圖譜詳見(jiàn)迪馬科技。

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7、注意事項(xiàng)

  • 做加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn),樣品提取時(shí),渦旋混合的強(qiáng)度應(yīng)在2000rpm以上,樣品與提取溶劑充分地混合,有利于提高目標(biāo)物的提取效率。

  • 經(jīng)QuEChERS凈化后的上清液,需要濃縮至小于1mL,剩余的液體不宜過(guò)少,以免造成回收率損失。

  • 棕櫚油等樣品,在提取、凈化、濃縮、定容后,油脂會(huì)隨著時(shí)間的推移逐漸析出,需要增加一個(gè)靜置冷凍的過(guò)程,冷凍時(shí)間嘗試過(guò)5、10、20、30、60分鐘,隨后取出過(guò)濾,上機(jī)分析,經(jīng)過(guò)20小時(shí)靜置后觀察樣品瓶中的液體狀態(tài),發(fā)現(xiàn)定容后的液體在5、10、20分鐘后,樣品瓶中的液體還會(huì)繼續(xù)有油脂析出,冷凍30、60分鐘后,樣品瓶中的液體,油脂停止析出,最終確定冷凍時(shí)間30分鐘為最佳時(shí)間。

  • 固體類樣品,當(dāng)樣品中含有少量水分時(shí),需要加入無(wú)水硫酸鈉將樣品分散。相比國(guó)標(biāo)方法中加入飽和氯化鈉溶液,實(shí)驗(yàn)證明,加入無(wú)水硫酸鈉,樣品分散性更好。

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8、相關(guān)產(chǎn)品信息

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北京迪科馬科技有限公司(迪馬科技)

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